样本源泉平日为大鼠血清、血浆或细胞提拔上清等。若收罗血清,需操纵无菌打针器或采血针从大鼠体内抽取血液,放入无菌离心管中,静置 30 分钟至 1 幼时,待血液凝结后,以 3000rpm 旁边的转速离心 10 - 15 分钟,幼心接收上层血清至新的无菌管中。血浆样本则需正在采血时插足适量抗凝剂,如肝素钠或 EDTA,采血后顷刻失常混匀,随后同样以适当转速离心获取血浆。细胞提拔上清正在汇集时要确保无细胞污染,可通过低速离心去除细胞碎片,汇集上清液。
取出试剂盒中的浓缩洗涤缓冲液,遵循仿单指定的稀释比例,平常为 1:20 - 1:30(比如,若浓缩液为 10mL,插足 190 - 290mL 蒸馏水或去离子水),舒缓插足稀释用水,边加边轻轻搅拌或失常混匀,确保充满羼杂平均,配造好的洗涤缓冲液应置于室温备用,且提倡当天配造当天操纵,省得繁茂细菌影响洗涤效率。
首次孵育结尾后,幼心取出微孔板,揭开封板膜,将微孔板颠倒正在清洁的吸水纸上,轻轻拍打,尽量排空孔内液体。随后向每孔插足预先配造好的洗涤缓冲液,每孔加 300μL 旁边(依仿单切确量),浸泡 1 - 2 分钟后,再次颠倒微孔板,甩掉洗涤液,这样反复洗涤 3 - 5 次,务必将孔内未贯串的物质冲洗清洁,结尾一次洗涤后,可将微孔板颠倒正在吸水纸上斯须,吸干残留的洗涤液。
二次孵育杀青后,再次反复洗涤措施,彻底消灭未贯串的二抗。接着插足显色底物溶液,平常每孔加 100μL,轻轻振荡微孔板,使底物溶液平均漫衍于各孔。将微孔板置于室温下避光显色,亲近观看色彩改观,显色时代平日正在 10 - 30 分钟之间,整个时长取决于样本中抗体含量及显色反响的强度。当看到程序品孔呈现显然的色彩梯度改观且样本孔色彩改观趋于安靖时,即可计算终止反响。
遵循酶标仪读取的程序品各浓度梯度的吸光度值,应用专业画图软件或办公软件(如 Excel)绘造程序弧线,平日采用四参数拟合弧线法,以程序品浓度为横坐标,吸光度值为纵坐标。然后将样本孔的吸光度值代入程序弧线方程,算计出样本中大鼠抗卵清卵白 IgG3 抗体的含量。正在剖判结果时,要充满研讨实行差错、样本稀释倍数等身分,对结果的牢靠性举办归纳评估,若展现非常结果,可研讨反复实行举办验证。
通过苛谨遵守以上操作措施,您便能熟练使用优品生物的大鼠抗卵清卵白 IgG3 抗体检测试剂盒,精确获取实行数据,为您的科研、分娩等合联任务供给有力支持。